p21、p53及pcna在人皮肤基底细胞癌和鳞状细胞癌中的表达
中华皮肤科杂志1998年第6期第31卷论著摘要
作者：王宏伟王秀丽王椿森
单位：430022武汉，同济医科大学附属协和医院皮肤科[王宏伟(现在上海市皮肤病性病防治中心)王椿森]；湖北医科大学附属第一医院皮肤科(王秀丽)
为了探讨ras基因、p53基因及pcna与基底细胞癌(bcc)和鳞状细胞癌(scc)发生、发展的关系，我们采用链霉亲合素-生物素化过氧化物酶复合物(sabc)连接系统，对10例bcc及10例scc组织中p21、p53及pcna蛋白表达进行了检测。
一、材料与方法
(一)材料：
1.标本：选择1986～1996年保存资料完整的10例bcc和10例scc石蜡包埋组织共20份，均经he染色明确诊断。scc按broders分类法将其分为ⅰ～ⅳ级，其中ⅰ级4例、ⅱ级4例、ⅲ级2例。
2.试剂：鼠抗人广谱p21单克隆抗体、鼠抗人p53单克隆抗体均为美国santacruz公司产品；鼠抗人pcna单克隆抗体为sigma公司产品；sabc试剂盒由武汉博士德生物工程公司提供；防脱片剂apes为sigma公司产品。
(二)免疫组化染色：载玻片先以apes处理，石蜡包埋组织连续作厚4～5μm切片，切片经脱蜡、水化，再以3％h2o2灭活内源性酶、微波修复抗原及正常山羊血清分别处理标本，然后分别滴加p21、p53及pcna单抗。4℃过夜，再滴加生物素化二抗及sabc复合物，以上每一步骤前均以0.1mol/lpbs缓冲液(ph7.4)充分浸洗标本，最后dab显色、苏木素轻度复染、脱水、透明、封片。用已知阳性片作阳性对照，以pbs代替一抗作阴性对照。
(三)判断标准：免疫组化染色阳性为棕黄色，不着色为阴性。p21定位于胞浆及胞膜。p53及pcna定位于细胞核。参照garcia[1]的判断方法确定3种蛋白阳性反应细胞半定量分级：1细胞浅棕黄色着色为1，深棕色为2；2阳性着色细胞比例＜20％为1，20％～50％为2，＞50％为3。以上两项相加等于2～3为(＋)，3～4为()，≥4为()。统计学处理采用χ2检验。
二、结果
正常皮肤组织中无p21、p53表达，pcna仅见于表皮基底层细胞，p21、p53及pcna在bcc和scc中的表达情况见附表，其中1例bcc及5例scc同时出现p21、p53及pcna阳性着色。
附表p21、p53及pcna在基底细胞癌和鳞状细胞癌中的表达
病种例数p21染色p53染色pcna染色-+-+-+基底细胞癌10901082000244鳞状细胞癌ⅰ级4211022000310ⅱ级4013011200040ⅲ级2000200020002
三、讨论
我们检测10例bcc和10例scc组织中p21蛋白阳性表达率分别为10％和80％，两者之间有显著性差异(p＜0.05)。说明bcc和scc存在p21蛋白过度表达，且scc明显多于bcc，这与chesa认为分化好的肿瘤比分化差的肿瘤p21蛋白表达少的观点相一致[2]。在scc不同病理分级中，肿瘤细胞p21着色强度与scc病理分级呈正相关，说明p21着色强度与肿瘤细胞分化程度有关。
本文结果显示bcc和sccp53阳性表达率分别为20％和70％，两者之间有显著性差异(p＜0.05)。在scc不同病理分级中，p53蛋白着色强度与分布亦有所不同。随scc病理分级增高，p53蛋白阳性着色强度增强。ⅰ、ⅱ级scc的p53阳性细胞主要分布于癌巢边缘，角化区不出现p53阳性细胞，而2例ⅲ级scc则弥漫分布于肿瘤全层。提示突变型p53蛋白表达强度及分布部位可能与scc的恶性程度有关。pcna是一种仅在增殖细胞中合成的多肽，可较准确地反映细胞所处增殖状态[3]。本文中bcc和scc均全部出现pcna阳性着色，两者之间无显著性差异，提示bcc和scc均存在肿瘤细胞的增殖，而bcc是一种恶性度低、很少发生转移的肿瘤，故认为pcna只能反映细胞增殖状态和所处周期，而不能反映出细胞增殖的性质，用pcna单一指标判断肿瘤的恶性程度及预后是不妥的。
参考文献
1garciarl.coltreramd,gownam.analysisofproliferativegradeusingantipcna/cyclinmonoclonalantibodiesinfixed,embeddedtissues:comparisonwithflowcytometricanalysis.amjpathol,1989,134∶733-739.
2chesapg,rettigwj,melamedmr,etal.expressionofp21rasinnormalandmalignanthumantissues:lackofassociationwithproliferationandmalignancy.procnatlacadsciusa,1987,84∶3234-3238.
3yuccw,fletchercdm,newmanpl,etal.acomparisonofpcnaimmunostaining,agnorstaining,andhistologicalgradingingastrointestinalstromaltumours.jpathol,1992,166∶147-152.
(收稿：1997-09-22修回：1998-01-26)