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中药射干提取物对皮肤癣菌抑菌作用研究

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时间:2015-04-17 13:26:23 出处:未知
本文导读:中药射干提取物对皮肤癣菌抑菌作用研究 中华皮肤科杂志1998年第5期第31卷论著摘要 作者:刘春平王凤荣南国荣四荣联王刚生郭文友 单位:050051石家庄,河北医科大学第三医院(刘春平
中药射干提取物对皮肤癣菌抑菌作用研究

中华皮肤科杂志1998年第5期第31卷论著摘要

作者:刘春平王凤荣南国荣四荣联王刚生郭文友

单位:050051石家庄,河北医科大学第三医院(刘春平);第二医院(南国荣四荣联王刚生郭文友);河北医科大学病理研究室(王凤荣)

本实验选用中药射干进行研究,测定各部分提取物对5种常见皮肤癣菌的抑菌作用,以期为临床采用射干提取物治疗皮肤癣菌病提供科学依据。

一、材料和方法

1.菌种:红色毛癣菌(tr)、须癣毛癣菌(tm)、犬小孢子菌(mc)、石膏样小孢子菌(mg)和絮状表皮癣菌(ef)各1株,均为购于中国协和医科大学皮肤病研究所菌种保藏中心的标准株。

2.药物、药物提取及培养基制备:射干1000g,由本院中药房提供。根据李应勤等[1]的方法,取射干1000g粉碎后,以95%乙醇回流提取3次。合并提取液,加热浓缩,得稠膏200g,加水溶解,滤去不溶物。水溶液依次用乙醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取,减压回流,三部分得量分别是25g、9g和30g。取三部分提取物和前两部分混和物(1∶1)各2g、2g、5g和2g,分别溶于3ml二甲基亚砜中,将4种溶液分别以沙堡琼脂培养基稀释至100ml做为初浓度,再倍比稀释5次,得6个浓度的系列药基。设实验组、对应浓度的二甲基亚砜对照组及空白对照组。冷藏备用。

3.抑菌效果观察:将5种皮肤癣菌分别移种于沙堡琼脂培养基,25℃培养7~14天,以手术刀刮取菌丝体,加入无菌生理盐水,研磨,至形成菌悬液(菌丝长度约为10~50μm)。离心(4000r/min,5分钟),弃上清液。取沉淀菌丝分别加入沙堡液体培养基中,用血细胞计数板调节菌丝浓度为0.5~1.0×107cfu/ml。5种菌悬液分别振荡混匀,接种于实验组和对照组培养基斜面的底部,接种量10μl,平行样品3管。试管直立放置,25℃培养2周。3管均无生长为阴性,阴性管的最低药物浓度为对该菌的最小抑菌浓度(mic)。同时记录阳性管中菌丝体高度(cm),以观察有无量效反应关系。

4.流式细胞术样品制备及检测:取抑菌效果最好的射干提取物,根据mic以沙堡液体培养基为基质,配制成药液,挑取tr菌落(沙堡琼脂培养基,25℃培养12天)边缘菌丝体,浸泡于药液。24小时取出,5%甲醛溶液固定,剪碎,加入0.5%盐酸胃蛋白酶1ml,37℃消化15分钟,边消化边吹打,消化后于高倍镜下可见大量单体细胞。200目尼龙网过滤,低速离心去碎片,采用溴化乙啶一步插入性染色法进行染色,500目铜网过滤,待测[2][ht5”〗。同时设二甲基亚砜对照组和空白对照组,每组平行样品3份。以facs420型流式细胞仪检测,测量数据和图形输入hp-300consort30计算机进行处理。测定前以鸡红细胞作为标准样品调整仪器的cv值在5.0%以内。

5.统计学处理:用poms软件对阳性管中菌丝体高度进行直线相关回归处理。以t检验处理流式细胞术检测数据,并计算pi值[3]

二、结果

1.射干提取物中乙醚部分对5种皮肤癣菌的mic为1.25~2.5mg/ml。乙酸乙酯部分对tr和ef的mic为20mg/ml,对其余3种菌在检测范围内无效。正丁醇部分在检测范围内对5种菌均无效。混和物的mic为1.25~2.5mg/ml,对tr、tm和mg的抑菌作用略强于乙醚部分,对mc和ef的抑菌作用等同于单纯乙醚部分。

2.乙醚部分抗5种皮肤癣菌各管生长情况及统计学处理见附表。由附表中可以看出,乙醚部分对5种皮肤癣菌的抑菌作用均有量效反应关系。

附表不同浓度射干乙醚提取物抗5种皮肤癣菌各管生长情况

(菌丝体高度)及统计学处理(cm)

皮肤癣菌0.625mg/ml1.25mg/mlry=a+bxp123123红色毛癣菌0.5*0.40.3000-0.9608y=0.8-0.64x<0.01须癣毛癣菌10860.60.50.4-0.7662y=8.25-3.7143x<0.05石膏样小孢子菌6.565.51.11.00.9-0.845y=6.5-2.8571x<0.01犬小孢子菌2.521.5000-0.9608y=4-3.2x<0.01絮状表皮癣菌0.30.20.1000-0.866y=0.4-0.32x<0.01注:提取物浓度为2.5、5.0、10.0、20.0mg/ml时5种皮肤癣菌各管均阴性。输入数据取至出现阴性结果的第1大组(如tr输入6组数据)3.取乙醚部分mic的最高值2.5mg/ml配制药液。流式细胞计数检测结果显示,药物作用后trs期dna含量增高,与两对照组相比均有显著性差异(p<0.05)。两对照组之间无显著性差异(p>0.05)。三组的pi值分别为:实验组53.95%,二甲基亚砜对照组38.33%,空白对照组38.11%,各组之间均无显著性差异(p>0.05)。

三、讨论

中药射干属于鸢尾科植物射干的干燥根茎[4]。关于射干抑制皮肤癣菌的研究已有报道,但均用射干全药。本实验依射干药用成分极性的增强,将其分别提取于乙醚、乙酸乙酯和正丁醇中。实验结果显示,射干的乙醚部分提取物对5种常见皮肤癣菌的抑菌效果最好,具有量效反应关系。表明射干中极性小的亲脂性成分是其抗皮肤癣菌的有效成分。

流式细胞计数已应用于真菌领域有关研究。皮肤癣菌通常状态下以菌丝形式存在,本实验用0.5%盐酸胃蛋白酶对其进行消化,从而将多细胞形式的菌丝变成细胞单体。经药物作用后,tr的dna含量增高,有较强的增殖活性,可能是tr遇到不利条件时,为了生存出现的代偿性变化,或可能菌丝细胞不全有核,制成单体后,各期带核的细胞数不一致等因素所致,有待进一步研究。

参考文献

1李应勤,陆蕴茹,魏璐雪.白射干黄酮类成分的研究.药学学报,1986,21∶836-841.

2左连富.流式细胞术与生物医学.第1版.沈阳:辽宁科学技术出版社,1996.68-73.

3李荫英,朱永德,郑力芬,等.应用fcm和tem分析人胚肺二倍体细胞.中华物理医学杂志,1992,14∶240-243.

4江苏新医学院.中药大辞典.第1版.上海:上海科学技术出版社,1991.1883-1885.

责任编辑:屈屈 关键词:皮肤 部分 细胞 乙醚 提取物

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