c57bl6小鼠毛发周期动物模型的建立
中华皮肤科杂志1999年第4期第32卷论著
作者：杨淑霞马圣清钟志红秦俭李志新武玲慎
单位：100034北京医科大学第一附属医院皮肤科(杨淑霞马圣清钟志红秦俭武玲慎)；北京医科大学中西医结合教研室(李志新)
关键词：毛发小鼠；近交c57bl6
【摘要】目的为研究毛发周期，本实验建立了适合的动物模型。方法用c57bl6小鼠为动物模型，对25只小鼠用松香/蜡(1∶1)混合物拔毛诱导其毛发自休止期进入生长期，每天观察皮肤色泽变化和毛囊组织学改变。结果拔毛处皮肤颜色于第5～6d由粉红色(休止期)变成黑色(生长期)，第17～19d又经灰色(退行期)变成粉红色(休止期)。组织学显示，小鼠在拔毛后第5～6d处于生长期第ⅳ亚期，第17～19d由生长期进入退行期，第20d以后，均处于休止期。松香/蜡混合物拔毛可诱导c57bl6小鼠同步进入新的毛发生长周期，并且小鼠皮肤颜色的变化和组织学上毛发周期时相的变化是相符的。结论用c57bl6小鼠作为毛发周期动物模型是可行的。
establishmentofhaircycleanimalmodelwithc57bl6mice
yangshuxia,mashengqing,zhongzhihong,etal.
departmentofdermatology,thefirsthospital,beijingmedicaluniversity,beijing100034
【abstract】objectivetoestablishedananimalmodelforstudyingthehaircycle.methodsusingc57bl6miceasanimalmodel,hairshaftsof25miceweredepilatedbywax/resinmixturetoinducethehairfolliclesfromtelogentoanagen.skincolorandhistologicalchangeswereobserveddaily.resultsafterdepilation,theskincolorofthosemiceturnedfrompink(telogen)toblack(anagen)inday5～6andturnedfromgray(catagen)topink(telogen)inday17～19.histologically,anagen(substageiv)tookplaceinday5～6,changedtocatageninday17～19,andenteredtelogeninday20afterdepilation.itshowedthatdepilationbywax/resinmixturecouldinducec57bl6micefromtelogentohighlysynchronizedhairgrowthcycle.thechangesofskincolorwereconsistentwiththehistologicalchangesofhaircycle.conclusionc57bl6micecouldbeusedasananimalmodelforfurtherstudiesonhaircycle.
【keywords】hairmice,inbredc57bl6
毛发是周期性生长的，分生长期、退行期和休止期3个阶段。生长期时，毛囊具有高度代谢活性，形成有色素的高度分化的毛干，休止期时这些活动则停止。位于毛母质中的黑素细胞仅在生长期产生黑色素，从而使毛发具有颜色[1]。这种周期性行为在一些动物中是同步的，如大鼠和小鼠，而在豚鼠及人类中则是不同步的。一般认为毛发周期主要是由皮肤固有的“生物钟”调控的，具体机制尚不十分清楚，然而激素、营养、情绪及药物等因素均对毛发周期有一定的影响[2]。为研究毛发的周期性改变及其影响因素，建立合适的动物模型是十分必要的，该动物的毛发周期须同步，周期较短，而且分期明确，易于观察。国外用c57bl6或c3h小鼠已成功地建立了动物模型，而在我国该项研究尚未开展。我们参照paus的方法[3]，采用c57bl6小鼠建立毛发周期动物模型，为今后研究毛发周期打好基础。
材料和方法
1.动物：c57bl6小鼠，雌性，6～8周，15～20g，同系，共25只，北京医科大学动物室提供。选择皮色粉红，毛发属于休止期的小鼠。
2.毛发生长期的诱导：将1∶1混合的松香/蜡加热熔化后涂于小鼠背部，凝固变硬后揭去，从而达到拔毛的效果。
3.观察指标：每天观察小鼠之皮色变化。组织学检查：每天用断颈法处死1只小鼠，在拔毛部位切取皮肤标本，10％福尔马林固定，脱水，石蜡包埋，切片，he染色，光学显微镜下观察毛囊的周期性变化。
结果
1.小鼠皮肤色泽改变：拔毛后第5～6d局部皮肤变黑，第9～11d局部可见新毛长出，第17～19d变成灰色，第20d左右即变回粉红色。在变粉红色过程中，头端先于尾端出现颜色变化。
2.组织学检查：拔毛后第1d，毛囊形态与休止期无明显变化，毛囊较小，毛乳头细胞小而排列紧密，毛乳头呈浓缩的细胞团样，位于真皮和皮下组织交界处水平，此时真皮和皮下脂肪层有少许淋巴细胞浸润；第2～3d，可见毛囊向下生长，其末端毛囊上皮细胞(毛球)部分包绕毛乳头，毛乳头也较为疏松，体积稍增大；第5～6d，毛乳头更为疏松，完全被毛球包绕，毛囊向下延伸，毛球达皮下组织深层，此时可见毛球内有明显的黑素形成，并可见新的毛发和内毛根鞘；拔毛后第9d(见图1)，新毛长到毛囊口；第9～16d内毛囊形态变化不大。拔毛后第17～19d，毛球远端渐开口，至完全不包裹毛乳头，而在两者之间形成细胞索，毛囊下端移至真皮与皮下组织交界处，黑素生成减少至消失，毛乳头体积缩小。第20d后，毛囊下端与毛乳头间的细胞索缩短，毛乳头上移，位于毛囊下方。
讨论
chase指出，鼠类毛发生长期约17～19d，生长期又分6个亚期，第ⅰ亚期时毛乳头开始变大，rna合成增加，新的毛发胚芽开始生长；第ⅱ亚期，胚芽向下生长，部分包绕毛乳头，有内毛根鞘形成；第ⅲ亚期，毛乳头逐渐至完全被毛球包绕，并随毛囊向下生长至皮下组织深层，此时毛球内少量黑素细胞恢复活性，产生黑素；第ⅳ亚期，新的毛发形成，黑素较明显，内毛根鞘长到毛囊峡部；第ⅴ亚期，新生毛发达到表皮水平；第ⅵ亚期毛发长出毛囊，此期毛发生长速度最快。退行期比较短暂，毛母质细胞的分裂活性和黑素细胞的色素形成均停止，毛干末端呈杵状，毛乳头缩小，毛囊下段退化，和毛乳头间形成一个上皮细胞索。随后该细胞索收缩，毛乳头上移至立毛肌附着处水平，毛囊进入休止期的静止状态。
c57bl6小鼠在6～8周饲养良好状态下，所有毛囊均由生长期进入静止期，而且生理状态下不再自发进入生长期。经人工脱毛或拔毛等创伤刺激后可诱导其毛发进入生长期，并可自发经过退行期再进入休止期。这个周期活动与自然周期无明显差别[4]。该小鼠躯干皮肤的黑素细胞只存在于毛囊中，而且仅于生长期时合成黑素并传递给角质形成细胞，使皮肤变为黑色，至退行期，黑素的生成减少，皮肤呈灰色，至休止期黑素的生成完全停止，使皮肤变为粉红色，因此可简单地根据皮肤的颜色来判断毛发周期的变化[3]。本研究结果，小鼠在拔毛后1～4d内局部皮肤颜色虽未发生变化，但组织学上已呈现生长期早期的表现；第5～6d皮肤呈黑色，相应地组织学改变符合生长期第ⅳ亚期；第17～19d皮肤呈灰色，组织学上毛囊呈退行期改变；第20d以后，皮肤颜色变回粉红色，组织学呈休止期表现。该结果与paus的报道[4]基本一致。因此，我们认为用c57bl6小鼠研究毛发周期的动物模型是可行的。
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参考文献
1cesarinijp.melaninandmelanogenesisofthehair.in:camachof,eds.trichology.spain:aulamedicagroup,1997.65－74.
2camachof,montagnaw.someaspectsofthephysiologyofthehairfollicle.camachof,eds.trichology.spain:aulamedicagroup,1997.31－46.
3slominskia,pausr.melanogenesisiscoupledtomurineanagen:towardnewconceptsfortheroleofmelanocytesandtheregulationofmelanogenesisinhairgrowth.jinvestdermatol,1993,101:90s－97s.
4pausr,handjiskib,czarnetzkibm,etal.amurinemodelforinducingandmanipulatinghairfollicleregression(catagen):effectsofdexamethasoneandcyclosporina.jinvestdermatol,1994,103:143－147.
收稿：1998－08－01修回：1998－11－28